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DICP OpenIR  > 中国科学院大连化学物理研究所  > 学位论文
学科主题: 物理化学
题名: 壳寡糖诱导烟草抗性相关基因的克隆和鉴定
作者: 张付云
答辩日期: 2007-01-22
导师: 张玉奎
专业: 分析化学
授予单位: 中国科学院研究生院
学位: 博士
摘要: 壳寡糖能有效的诱导植物产生抗病性。本实验室以枯斑三生烟草(Nicotiana tabacum var. samsun NN)为材料,应用mRNA差异显示技术获得96条差异条带,本论文实验从差异条带的筛选着手进行了以下工作: 1.壳寡糖诱导抗性相关基因的筛选。对11个通过mRNA差异显示获得的cDNA条带进行了筛选,结果得到枯斑三生烟的11个没有报道过的cDNA的3’端序列,其中一个cDNA片段与本塞姆氏烟草SKP1 (Nb SKP1)高度同源,因有NbSKP1蛋白与抗病相关的报道,故对其进行深入研究。 2.NtSKP1全长cDNA的克隆。利用RACE的方法成功地克隆了NtSKP1 cDNA的5’端核苷酸序列和全长cDNA,建立了NtSKP1蛋白的三维结构模式图;序列分析结果表明5’非翻译区域具有转录增强子、光响应元件和一个热激响应相关的顺式作用元件;Southern blot方法分析NtSKP1基因在基因组中的拷贝数为单拷贝。 3.NtSKP cDNA在原核细胞中的表达。成功地建立了NtSKP1 cDNA的原核表达体系;纯化出了NtSKP1-His-tag融合蛋白,并应用质谱分析鉴定了该cDNA编码的蛋白质确为NtSKP1蛋白。 4.NtSKP1在细胞中的定位。GFP荧光标记亚细胞定位结果显示NtSKP1-GFP融合蛋白通常分布于胞浆,在特定细胞状态时核区也有分布,和与其互作的26 S蛋白酶体的分布方式一致。 5.初步进行了转基因烟草的筛选。为了进一步确定NtSKP1在植物生长发育过程及抗性中的作用,构建了NtSKP1的二元干扰载体,通过叶盘法转化烟草,现已筛选出含空载体的阳性对照转基因烟草,含NtSKP1干扰载体的转基因植株正在筛选中。
语种: 中文
内容类型: 学位论文
URI标识: http://cas-ir.dicp.ac.cn/handle/321008/114759
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张付云. 壳寡糖诱导烟草抗性相关基因的克隆和鉴定[D]. 中国科学院研究生院. 2007.
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