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DICP OpenIR  > 中国科学院大连化学物理研究所  > 学位论文
学科主题: 物理化学
题名: 肿瘤治疗用重组内皮抑素CHO细胞的微囊化研究
作者: 张英
答辩日期: 2007-05-31
导师: 马小军
专业: 生物化工
授予单位: 中国科学院研究生院
学位: 博士
摘要: 微囊化基因工程细胞移植是一种新兴的肿瘤抗血管治疗方法,如果将此技术应用到临床研究,就需要制备大量的细胞活性良好、重组蛋白表达量高的生物微胶囊,然而由于目前生物微胶囊规模化制备和培养技术还不成熟,阻碍了其在临床治疗中的推广与应用。本论文以重组CHO细胞为模型,探索了微囊化重组细胞制剂规模化制备方法及其在肿瘤治疗中应用的可行性。 微囊化重组CHO细胞体外和体内都能迅速生长和表达内皮抑素,并且体外可以抑制牛主动脉血管内皮细胞增殖,体内可以抑制鸡胚尿囊膜血管生成。 确定了移植用微囊化重组细胞制剂的最佳条件,固化微囊、粒径为200μm和体外培养4天的微囊化重组细胞适宜于移植。 并且腹腔移植微囊化重组CHO细胞治疗B16黑色素瘤,肿瘤生长被抑制66.4%,肿瘤组织内血管密度降低59.4%,荷瘤小鼠的存活率提高40%。 生物反应器悬浮培养的重组CHO细胞可以进行微囊包裹,制备微囊时采用对数生长期末期细胞 (活细胞比例超过90%) 和1×106 cells/mL microcapsule的接种密度有利于微囊化细胞生长和内皮抑素的表达。并且在每一批次微囊制备过程中重组CHO细胞在海藻酸钠和氯化钙中的时间都应少于3小时,否则细胞由于所受到的损伤严重而不再生长。微囊化细胞可以采用冷冻方法保存,并且冷冻保存对微囊化重组CHO细胞体内生长、内皮抑素表达和微囊稳定性没有显著的影响,但需要体外培养4天以保证冷冻保存后微囊化细胞的活性。在培养过程中微囊接种量为5%时有利于细胞生长和内皮抑素表达,并且应用生物反应器可以规模化培养微囊化细胞。
语种: 中文
内容类型: 学位论文
URI标识: http://cas-ir.dicp.ac.cn/handle/321008/114821
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张英. 肿瘤治疗用重组内皮抑素CHO细胞的微囊化研究[D]. 中国科学院研究生院. 2007.
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