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DICP OpenIR  > 中国科学院大连化学物理研究所  > 学位论文
学科主题: 物理化学
题名: 新型蛋白质微分离与鉴定平台的构建
作者: 段继诚
答辩日期: 2008-05-06
导师: 张玉奎
专业: 分析化学
授予单位: 中国科学院研究生院
学位: 博士
摘要: 蛋白质组学已成为后基因组时代的重要研究主题。近年来,色谱微分离技术和质谱鉴定技术的发展加快了蛋白质组的研究进程,有望成为蛋白质组研究的主流技术之一。因此,本文致力于构建新型蛋白质微分离与鉴定平台,为蛋白质组研究提供高效、高速、高通量的蛋白质分析工具。 发展并完善了色谱微分离与质谱鉴定联用的接口技术。设计了一种微型多通道电喷雾离子源,实现了多种微分离模式与质谱的联用,扩展了质谱的应用。利用氢氟酸刻蚀技术,制作了纳升级流量的质谱接口,将质谱的检测灵敏度提高了3倍以上。在此基础上,发展了零死体积加压电色谱与质谱联用的柱上刻蚀接口,并通过预测和优化分离条件,实现了多肽的快速分离。 在常规液相色谱仪的基础上,发展了自动化双分流纳升级液相色谱与质谱联用系统。通过对新型分流方法和柱上富集技术的理论研究,在减少柱前死体积对分离影响的基础上,实现了纳升级液相色谱的大体积进样;利用该系统,可将蛋白酶解产物的鉴定检出限降至0.5 fmol/μL。 采用原位聚合技术,在毛细管内制备了多种基于整体材料的微型胰蛋白酶反应器。通过对基质和反应器制备条件的优化,将蛋白质酶解时间缩短到几分钟内。在此基础上,将酶反应器与液相色谱/质谱系统联用,探讨了酶反应器用于肽段序列指纹谱蛋白质鉴定的可行性。 将微型酶反应器与微分离和鉴定系统联用,发展了两种蛋白质快速在线酶解和分离鉴定系统。其中微量样品分析平台可对10 nL简单蛋白质样品进行分析;双分流联用系统可对微升级样品进行分析。采用该联用系统对小鼠肝脏蛋白组样品进行了在线分析,一次检测可鉴定100多个蛋白质,显示出分析复杂蛋白组样品的潜力。
语种: 中文
内容类型: 学位论文
URI标识: http://cas-ir.dicp.ac.cn/handle/321008/114869
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段继诚. 新型蛋白质微分离与鉴定平台的构建[D]. 中国科学院研究生院. 2008.
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