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DICP OpenIR  > 中国科学院大连化学物理研究所  > 学位论文
学科主题: 物理化学
题名: 杂化硅胶整体材料固定化酶反应器的制备及应用
作者: 马俊锋
答辩日期: 2000-12-31
导师: 张玉奎、张丽华
专业: 分析化学
授予单位: 中国科学院研究生院
学位: 博士
摘要: 发展高效快速的蛋白质酶解方法以及相关的集成化分析平台将有助于推动蛋白质组学的深入研究。本论文以杂化硅胶整体材料为载体,制备了多种固定化酶反应器,并在此基础上构建了集成化蛋白质组分析平台。 研制了以杂化硅胶整体材料为载体的共价键合型胰蛋白酶反应器。其表观酶活性是自由溶液酶的~6600倍,可将标准蛋白质的酶解时间缩短到30 s。经75 s酶解,从10 μg鼠肝提取蛋白质样品中鉴定出876个蛋白质;比经自由溶液24 h酶解鉴定到的蛋白质多92个。 研制了以杂化硅胶整体材料为载体的金属离子螯合型胰蛋白酶反应器。不仅可将标准蛋白质的酶解时间由12 h缩短到50 s,而且可很方便地进行再生,或实现胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的双酶解。经150 s酶解,从5 μg鼠肝提取蛋白质样品中鉴定出541个蛋白质;比经自由溶液24 h酶解鉴定到的蛋白质多58个。 构建了集成化蛋白质样品预处理-反相色谱分离-质谱鉴定平台。可将鼠肝提取蛋白质的预处理时间由离线的25.5 h缩短到在线的~7 min;采用两种方法鉴定的蛋白质数目相当(269 vs. 244)。此外,由于避免了多步离线操作,该平台对低丰度蛋白质表现出较高的检测能力。 研制了以杂化硅胶整体材料为载体的胃蛋白酶反应器,并在此基础上构建了甲酸辅助增溶、蛋白质在线酶解和SCX-mRPLC-ESI-MS/MS分离鉴定的膜蛋白组分析平台。从鼠肝微粒体膜蛋白质组样品中鉴定到235个蛋白质,其中91个为跨膜蛋白质。为深入开展高通量膜蛋白组研究提供了技术支撑。
语种: 中文
内容类型: 学位论文
URI标识: http://cas-ir.dicp.ac.cn/handle/321008/115067
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马俊锋. 杂化硅胶整体材料固定化酶反应器的制备及应用[D]. 中国科学院研究生院. 2000.
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