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DICP OpenIR  > 中国科学院大连化学物理研究所  > 学位论文
学科主题: 物理化学
题名: 基于生物质谱的蛋白质磷酸化分析新技术与新方法研究
作者: 韩广辉
答辩日期: 2000-12-31
导师: 邹汉法、叶明亮
专业: 分析化学
授予单位: 中国科学院研究生院
学位: 博士
摘要: 蛋白质的磷酸化作为一种普遍而且重要的蛋白质翻译后修饰,几乎调节着生命活动的所有过程。本论文致力于发展基于生物质谱的蛋白质磷酸化分析新技术与新方法。 针对磷酸化蛋白质组分析中缺少有效的磷酸肽分级方法,发展了一种基于强阴离子交换色谱(Strong Anion Exchange, SAX)的磷酸肽分级方法,系统考察了SAX进行磷酸肽分级、富集的性能,并应用于人肝癌旁组织样品的磷酸化蛋白质组分析,鉴定到168个磷酸化蛋白质和274个磷酸化位点。 针对当前人类肝脏磷酸化蛋白质组数据库亟待扩大的需求,利用新合成的粒径高度均匀的Ti4+-IMAC单分散微球富集磷酸肽,并与纳升级反相色谱长色谱梯度洗脱相结合应用于磷酸肽的液质联用分析,改善了样品的分离能力和磷酸肽鉴定的覆盖率,从正常人肝组织样品中鉴定到1023个磷酸化蛋白质和2225个磷酸化位点,是有关人肝组织蛋白质磷酸化非常重要的数据库,对于研究肝癌等肝脏重大疾病机理有重要的意义。 针对简单蛋白质样品磷酸化位点深度分析困难,发展了一种将改进的正伪数据库用于数据检索,并与多种蛋白酶酶切技术和多级质谱鉴定技术相结合建立了简单样品蛋白质磷酸化位点鉴定的方法,实现了对简单蛋白质样品蛋白质磷酸化位点全面、可靠、灵敏的鉴定,并应用于人体十分重要的激酶PKA的磷酸化位点鉴定。 针对酪氨酸磷酸肽纯化方法缺乏的问题,发展了一种基于Ti4+-IMAC富集和β-消除/Michael亲核加成反应相结合的方法,用于纯化酪氨酸磷酸肽,系统评价了该方法的性能,并与商品化的免疫亲和方法进行了比较,表明该方法对酪氨酸磷酸化分析具有有效、实用、可靠的性能
语种: 中文
内容类型: 学位论文
URI标识: http://cas-ir.dicp.ac.cn/handle/321008/115069
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韩广辉. 基于生物质谱的蛋白质磷酸化分析新技术与新方法研究[D]. 中国科学院研究生院. 2000.
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