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学科主题物理化学
基于衍生和富集策略的蛋白质/多肽高灵敏检测新方法研究
乔晓强
2011-01-19
导师张玉奎 ; 张丽华
专业分析化学
授予单位中国科学院研究生院
学位博士
英文摘要发展基于衍生和富集策略的蛋白质/多肽高灵敏检测技术对于深入开展蛋白质组学研究具有重要意义。本论文发展了多种荧光标记、化学衍生和样品富集新方法,并用于实现蛋白质/多肽的高灵敏检测。 发展了水溶性磺酸-3-氢-吲哚菁染料(sb-cy3-NHS),并实现了低浓度蛋白质的荧光衍生。在优化的衍生条件下,可将牛血清白蛋白(BSA)的检测限降低到12.8 nM;比直接紫外检测和商品化的苯异硫氰酸酯标记后荧光检测的检测限降低了约100 倍。此外,还将该染料用于卵清提取蛋白分析,实现了低浓度蛋白质的有效标记和高灵敏检测。设计了基于中空纤维膜接口的蛋白质原位富集-荧光衍生装置,可将BSA 的检测灵敏度提高约200 倍。发展了基于二维液相色谱-荧光检测法的差异蛋白质分析技术,并用于帕金森病和正常大鼠中脑差异蛋白质的分析,共鉴定到9 个明显差异的色谱峰。说明基于该方法有望发现低丰度差异蛋白质。将多种哌嗪衍生物用于肽段羧基的衍生。结果表明:具有最高疏水性和气相加氢能力的哌嗪试剂可显著提高肽段的离子化效率。合成了溴化1-丁基,3-(3-氨丙基)咪唑,并将其应用于肽段的羧基衍生。结果表明:该试剂具有接近100%的衍生效率;不仅可将模式肽段RVYVHPI 的检测灵敏度提高40 倍,而且还能增加其所带电荷数目,更有利于电子转移裂解(ETD)检测。 采用基于肼化学富集的方法同时分析了鼠脑可溶和不可溶蛋白质组分,共鉴定到462个非冗余的N-连接糖蛋白,其中包括849 个唯一的N-连接糖基化位点。发展了基于双功能团荧光标签,8-氨基萘-1,3,6-三磺酸二钠盐,专一多糖标记结合二氧化钛糖基化选择性富集的新型N-连接糖基化富集技术;可同时实现中性糖肽和唾液酸糖肽的选择性富集。
语种中文
文献类型学位论文
条目标识符http://cas-ir.dicp.ac.cn/handle/321008/116476
专题中国科学院大连化学物理研究所
推荐引用方式
GB/T 7714
乔晓强. 基于衍生和富集策略的蛋白质/多肽高灵敏检测新方法研究[D]. 中国科学院研究生院,2011.
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