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DICP OpenIR  > 中国科学院大连化学物理研究所  > 学位论文
学科主题: 物理化学
题名: 蛋白质样品预处理新技术与新方法研究
作者: 孙良亮
答辩日期: 2011-01-19
导师: 张玉奎 ;  张丽华
专业: 分析化学
授予单位: 中国科学院研究生院
学位: 博士
摘要: 本论文基于中空纤维膜材料、磁性材料以及离子液体,发展了蛋白质样品富集、缓冲溶液交换以及增溶的新技术与新方法。 研制了基于醋酸纤维素中空纤维膜的在线溶剂置换接口。1min 内可将蛋白质样品的盐浓度降低近2 个数量级。30s 内可将蛋白质样品的乙腈浓度降为初始值的1/10;pH 值由3.0 调节为~8.0。将此接口与固定化胰蛋白酶反应器联用,在5min 内实现蛋白质样品的在线溶剂置换、富集与酶解,消耗时间为传统方法的近1/200。 研制了C8 功能化磁性介孔杂化微球,用于小蛋白质和低丰度肽段的富集。可将小蛋白质的信噪比提高近2 个数量级;将标准蛋白质酶解产物的检测限降低至少1 个数量级。富集效果比真空浓缩方法优越;与Anchor Chip 靶板以及ZipTip C18 相当。展了基于离子液体1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸(BMIM BF4)的膜蛋白质样品预处理方法。比传统方法鉴定到更多疏水性肽段与整合膜蛋白质。处理鼠脑膜蛋白质所得酶解产物经2D-nanoSCX-RPLC-ESI-MS/MS 分析,高可信地鉴定到1,450 个非冗余蛋白质,包含418 个跨膜蛋白质。 采用BMIM BF4 膜蛋白质样品预处理方法、2D-nanoSCX-RPLC-ESI-MS/MS 以及SEQUEST 与pFind 数据库检索从人肝微粒体中高可信地鉴定到916 个膜蛋白质与557 个整合膜蛋白质,包含30 个细胞色素P450 酶与14 个尿苷二磷酸葡糖醛酸转移酶,其平均序列覆盖率分别高达31.89%与26.89%。
语种: 中文
内容类型: 学位论文
URI标识: http://cas-ir.dicp.ac.cn/handle/321008/116477
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孙良亮. 蛋白质样品预处理新技术与新方法研究[D]. 中国科学院研究生院. 2011.
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