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学科主题物理化学
亚心形四爿藻氢酶的纯化、表征及其基因信息研究
彦飞
2011-01-20
导师张卫
专业生物化工
授予单位中国科学院研究生院
学位博士
英文摘要亚心形四爿藻是本课题组筛选到的海洋单细胞产氢绿藻,经过产氢过程优化及调控,其产氢能力提高了几百倍,产氢速率已接近国际上深入研究的模式产氢藻种—淡水莱茵衣藻。本文即以四爿藻氢酶的分离纯化、性质表征及基因信息的研究为主要内容,为氢酶的改造与应用提供一定的基础和方法。 首先建立了氢酶提取与分析所用的基本研究方法,包括厌氧体系的构建,氢酶活性检测方法、蛋白质含量检测方法及蛋白质浓缩方法的比较等。并在此基础上,确定了氢酶提取的藻体原料及藻细胞破碎的方法,获得了氢酶粗提液。在厌氧环境中对氢酶的纯化步骤进行了优化,最终通过硫酸铵分级沉淀、离子交换层析和分子筛层析等方法,获得纯氢酶,并对其理化性质进行了表征。测定了氢酶N-末端的15 个氨基酸序列,与其他已知氢酶的同源性不高。 根据其他绿藻氢酶基因同源序列和亚心形四爿藻氢酶N-末端氨基酸序列,在保守处设计扩增引物,采用RT-PCR 和3′ RACE 的方法进行了氢酶基因钓取尝试,但未能获得目的基因。通过转录组测序对比了正常藻液和暗诱导后藻液的基因差异,并发现了与莱茵衣藻氢酶基因有高度相似的片段,初步推测其为亚心形四爿藻氢酶的基因片段,这为下一步工作奠定了基础。
语种中文
文献类型学位论文
条目标识符http://cas-ir.dicp.ac.cn/handle/321008/116483
专题中国科学院大连化学物理研究所
推荐引用方式
GB/T 7714
彦飞. 亚心形四爿藻氢酶的纯化、表征及其基因信息研究[D]. 中国科学院研究生院,2011.
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