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DICP OpenIR  > 中国科学院大连化学物理研究所  > 学位论文
学科主题: 物理化学
题名: 珊瑚藻溴过氧化物酶的分离纯化及催化特性研究
作者: 章表明
答辩日期: 2011-01-20
导师: 张卫
专业: 生物化工
授予单位: 中国科学院研究生院
学位: 博士
摘要: 钒-溴过氧化物酶(V-BPO)是一类重要的卤素过氧化物酶,具有良好的热稳定性和有机溶剂耐受性,能够催化多种反应,表现出良好的工业应用潜力。 论文建立了V-BPO 的快速高效分离纯化新工艺。粗酶液加入0.5mmol/L 原钒酸钠和氯化钙后,经热沉淀、硫酸铵沉淀、离子交换柱层析纯化后,酶活总收率为83%,为文献最高值的3.8 倍,比活310U/mg,为Sigma 商品酶的3.1 倍。 研究了纯化后V-BPO 的酶学特征。亚基分子量为64.4KDa,最适pH 为6.0,对MCD、H2O2 和KBr 的其Km 值分别为14.7μmol/L、0.203 和9.7mmol/L,钒和钙离子能提高其活性和热稳定性,具有良好的有机溶剂耐受性,能够催化烯烃反应,产物溴代醇和环氧化物可 通过改变反应条件进行调控。研究了经过钙、钒离子透析处理后V-BPO 利用H2O2 为氧源催化氧化环己烯生成环氧环己烷体系的特征,建立了产物的内法定量分析方法,优化反应条件后体系时空产率为4.8g/(h•L),对H2O2 收率为74%,均比文献最高值提高了78%,单位酶的催化效率为1.1mg/(U•h),是文献值的4 倍。 建立了V-BPO 以O2 为氧源,Zn 为还原剂,催化氧化环己烯生成环氧环己烷体系,优化反应条件为:150mmol/L Tris-Citric, 100UV-BPO, 4mmol Zn, 1mmol KBr, 0.4MPa O2, 总体积10ml,65℃反应3h,搅拌速率700rpm。优化条件下,产物对环己烯的收率为31%,选择性为97%,并对反应机理进行了探讨。
语种: 中文
内容类型: 学位论文
URI标识: http://cas-ir.dicp.ac.cn/handle/321008/116484
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章表明. 珊瑚藻溴过氧化物酶的分离纯化及催化特性研究[D]. 中国科学院研究生院. 2011.
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