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DICP OpenIR  > 中国科学院大连化学物理研究所  > 学位论文
学科主题: 物理化学
题名: 斯达氏油脂酵母油脂积累相关基因的研究
作者: 唐伟
答辩日期: 2010-05-26
导师: 赵宗保
专业: 生物化工
授予单位: 中国科学院研究生院
学位: 博士
摘要: 自然界中部分微生物能在适当的培养条件下,胞内贮存质量超过其细胞干重20%(w/w)的油脂,具有这种表型的微生物称为产油微生物。微生物油脂的长链脂肪酸成分与普通植物油脂相似,而有些微生物能生产多不饱和脂肪酸,所以微生物油脂发酵可文以斯达氏油脂酵母AS.2.1560 为研究对象,着重考察了异柠檬酸脱氢酶基因及苹果酸酶基因与斯达氏油脂酵母AS.2.1560 细胞油脂积累的相关性,为构建油脂酵母工程菌打下基础。 第一,优化了斯达氏油脂酵母AS2.1560 细胞总RNA 提取方法,将细胞总RNA 逆转录后作为模板,采用RACE 技术克隆得到了全长cDNA 序列为1,128 bp 的Lsactin 基因。 第二,分析发现随着菌体油脂含量的增加,细胞内外柠檬酸增加,而异柠檬酸脱氢酶活性下降。克隆了LsIDH 两个亚基基因LsIDH1 和LsIDH2,全长cDNA序列分别为1,122bp 和1,134 bp,荧光定量PCR 方法检测到LsIDH1 基因和LsIDH2 基因转录水平随着细胞内油脂积累而下降,说明LsIDH 可能参与调节细胞内油脂积累的过程。 第三,成功地克隆了细胞质苹果酸酶基因LsME1 全长cDNA 序列,长度为1,719 bp。通过构建原核表达载体及重组蛋白高表达和纯化方法,获得了LsME1 蛋白并进行了初步的生物化学表征,发现LsME1 偏好NAD+。此外,构建了携带LsME1 组成型表达载体的酿酒酵母BY4741 工程菌株。最后,初步探索了斯达氏油脂酵母AS2.1560 的遗传操作方法。
语种: 中文
内容类型: 学位论文
URI标识: http://cas-ir.dicp.ac.cn/handle/321008/116511
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唐伟. 斯达氏油脂酵母油脂积累相关基因的研究[D]. 中国科学院研究生院. 2010.
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