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DICP OpenIR  > 中国科学院大连化学物理研究所  > 学位论文
学科主题: 物理化学
题名: 蛋白质分离和翻译后修饰肽段富集新方法的研究
作者: 侯春彦
答辩日期: 2011-07-16
导师: 张玉奎 ;  张丽华
专业: 分析化学
授予单位: 中国科学院研究生院
学位: 博士
摘要: 本论文发展了新型蛋白质分离混合模式离子交换色谱法,以及针对磷酸肽和N-连接糖 肽的选择性富集技术,并将其成功地应用于复杂样品蛋白质或肽段混合物的分离富集中。 研制了分别以聚合物整体材料和无孔聚合物微球为基质的弱阴-弱阳混合模式离子交 换色谱微柱。在与胰蛋白酶酶解兼容的条件下(pH8),实现了酸性、碱性以及中性蛋白质 的同时分离;获得了比单一模式的离子交换色谱更高的分辨率。 以有机-无机杂化硅胶整体材料作为基质,采用戊二醛偶联法固载了磷酸螯合基团,进 而制备了一种新型Ti4+-IMAC 整体材料;并将其用于鼠肝线粒体提取蛋白质的分析。结果 表明:该材料具有选择性好、富集容量高、回收率高以及重现性好等优点。 分别研制了以Fe3O4 磁性纳米颗粒为载体的胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和胃蛋白酶反应 器,并将多酶酶解策略与杂化硅胶基质Ti4+-IMAC 整体柱的富集方法相结合,从人神经母 细胞瘤细胞的膜组分中鉴定到43 个磷酸化蛋白质,其中14 个定位于膜上,9 个含跨膜区。 发展了聚乙二醇偶联修饰和超滤分离相结合的方法,实现了N-连接糖肽的选择性富 集。该富集效果同商品化酰肼树脂微球富集效果相当,但是操作更为简便、选择性更好、 抗干扰能力更强。
语种: 中文
内容类型: 学位论文
URI标识: http://cas-ir.dicp.ac.cn/handle/321008/116533
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侯春彦. 蛋白质分离和翻译后修饰肽段富集新方法的研究[D]. 中国科学院研究生院. 2011.
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