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DICP OpenIR  > 中国科学院大连化学物理研究所  > 学位论文
学科主题: 物理化学
题名: 基于蛋白质组学的激酶底物和底物模体鉴定方法
作者: 张曼玉
答辩日期: 2011-07-24
导师: 叶明亮 ;  邹汉法
专业: 分析化学
授予单位: 中国科学院研究生院
学位: 博士
摘要: 蛋白质磷酸化是真核细胞中最普遍的翻译后修饰,几乎调控着蛋白的所有功能。在细胞信号转导中,激酶对底物的特异性磷酸化是研究得最多的重要调控机理之一,鉴定激酶底物不仅有助于研究细胞的生理学和病理学功能,而且有可能发现药物治疗的新靶点。本论文将蛋白质组学和体外磷酸化结合起来,发展了鉴定激酶底物以及底物模体的新方法。采用细胞裂解液作为蛋白来源,溴化氰活化的琼脂糖小珠作为蛋白载体,利用体外磷酸化和蛋白质组学策略发展了大规模鉴定激酶底物的新方法。当酪蛋白激酶2 作为模型激酶时,通过LC-MS/MS 检测、spectral count 半定量分析鉴定到266 个独立磷酸化肽段,对应167 个潜在的底物蛋白,其中包括11 个已知的体内真实底物。该法能够用于激酶底物的快速准确鉴定,并能同时给出底物的磷酸化位点信息。发展了一种蛋白质组学衍生肽段文库用于鉴定激酶底物模体的新方法。用碱性磷酸酶处理全细胞蛋白酶解液,去除内源性磷酸化后得到大量非磷酸化肽段的混合物。将此肽段文库跟激酶发生体外磷酸化后用LC-MS/MS 鉴定到472 条独立磷酸化肽段,并由此鉴定到激酶的底物模体S/T-D/E-x-D/E。该法能够快速准确的鉴定激酶底物模体,而且可以很方便的应用于其他激酶。
语种: 中文
内容类型: 学位论文
URI标识: http://cas-ir.dicp.ac.cn/handle/321008/116611
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张曼玉. 基于蛋白质组学的激酶底物和底物模体鉴定方法[D]. 中国科学院研究生院. 2011.
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