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学科主题分析化学
蛋白激酶和蛋白酶的底物筛选及特异性分析的蛋白质组学新方法研究
王春丽
2013-11-16
导师叶明亮 ; 邹汉法
专业分析化学
授予单位中国科学院研究生院
学位博士
英文摘要本论文致力于发展蛋白激酶和蛋白酶的底物筛选及特异性分析的蛋白质组学新方法,揭示蛋白激酶介导的磷酸化修饰和蛋白酶介导的降解修饰的信号调控机制,有助于发现新的药物靶点,实现疾病的靶向治疗。针对目前基于化学方法分离富集含有特定氨基酸序列肽段较难的问题,我们利用蛋白酶与底物的特异性识别作用,建立了一种选择性富集含有特定氨基酸序列肽段的酶化学方法,从血清中富集到168条含有PKA特异性作用模体K/R-X1-2-S/T的肽段,特异性为67.2%。针对目前利用合成肽段库确定激酶特异性的方法中肽段合成过程复杂、难以匹配真实底物蛋白序列而造成底物鉴定可靠性低等问题,发展了一种基于蛋白质衍生化肽段库和定量蛋白质组学技术相结合确定蛋白激酶特异性的新方法,并将其用于CK2激酶的特异性分析,得到CK2特异性作用模体S/T-D/E-X-E/D,进一步结合体内磷酸化蛋白质组,筛选出105个潜在的CK2底物蛋白。针对目前蛋白酶底物筛选方法操作步骤繁琐、通量低等问题,我们发展了一种基于固相酶切反应的规模化筛选蛋白酶底物的方法,并将该方法应用于蛋白酶caspase-3的底物分析,得到1098个体外caspase-3底物蛋白,是目前为止规模最大的caspase-3底物蛋白数据集。我们进一步将caspase-3体外底物蛋白与体内凋亡过程中降解的蛋白质进行比较,筛选出441个潜在的caspase-3底物蛋白,这些蛋白质对于研究caspase-3介导的凋亡机理具有重要意义。
语种中文
文献类型学位论文
条目标识符http://cas-ir.dicp.ac.cn/handle/321008/119837
专题中国科学院大连化学物理研究所
推荐引用方式
GB/T 7714
王春丽. 蛋白激酶和蛋白酶的底物筛选及特异性分析的蛋白质组学新方法研究[D]. 中国科学院研究生院,2013.
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