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DICP OpenIR  > 中国科学院大连化学物理研究所  > 学位论文
学科主题: 分析化学
题名: 基于亲水作用色谱的糖基化蛋白质组定性定量分析新方法研究
作者: 朱俊
答辩日期: 2014-05-10
导师: 邹汉法
专业: 分析化学
授予单位: 中国科学院研究生院
学位: 博士
摘要: 作为最重要的翻译后修饰之一,蛋白质糖基化在多种生物学功能和生物过程中发挥着关键作用,而糖链的异常变化则与多种疾病和癌症密切相关。本论文致力于在蛋白质组学水平上发展适合蛋白质糖基化定性和定量分析的新方法。针对糖基化蛋白质检测灵敏度低的问题,我们发展了一种基于亲水作用色谱富集法的糖基化微反应器,该微反应器整合了糖基化样品预处理所有三个步骤,能够在很大程度上减少样品损失,将糖基化蛋白质分析的灵敏度提高了5倍,并将样品预处理时间缩短了20-30倍。通过结合多酶酶切策略与亲水作用色谱和酰肼化学富集方法的结合,建立了一种用于复杂生物样品中N-糖基化蛋白质组的大规模鉴定系统,将其用于人肝样品中N-糖基化蛋白质的鉴定,共鉴定到了14,498条N-糖基化肽段,2,210个糖基化蛋白质和4,793个N-糖基化位点。通过结合同位素二甲基标记,亲水作用色谱法,质谱CID和HCD碎裂模式以及生物信息学数据处理方法,发展了一种用于位点特异性N-糖型的规模化定量分析系统。将该系统用于肝癌和正常血清中糖基化肽段和糖型的差异分析,共定量到219个位点特异性的N-糖型。通过结合酶解辅助亲水作用色谱法, TOF-CID的碎裂模式和计算机模拟的去糖基化策略,发展了一种用于O-GalNAc糖基化及其完整糖链的蛋白质组学分析方法。将该方法用于人血清中O-糖基化的糖型多样性研究,总共鉴定到了332个O-糖基化位点上的668个位点特异性的O-糖型。
语种: 中文
内容类型: 学位论文
URI标识: http://cas-ir.dicp.ac.cn/handle/321008/119858
Appears in Collections:中国科学院大连化学物理研究所_学位论文

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朱俊. 基于亲水作用色谱的糖基化蛋白质组定性定量分析新方法研究[D]. 中国科学院研究生院. 2014.
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