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DICP OpenIR  > 中国科学院大连化学物理研究所  > 学位论文
学科主题: 生物化工
题名: 产油真菌圆红冬孢酵母遗传操作平台构建及应用研究
作者: 林心萍
答辩日期: 2014-05-13
导师: 赵宗保
专业: 生物化工
授予单位: 中国科学院研究生院
学位: 博士
摘要: 微生物法转化生物质资源制备高还原度化合物,如长链脂肪酸衍生物、萜类化合物等,具有反应条件温和、可控性强、易于大规模生产等特点,是解决化石能源枯竭危机的重要途径之一。产油真菌——圆红冬孢酵母可作为一个优良的细胞工厂。然而,由于缺乏合适的遗传操作方法,菌株理性改造研究受到制约。本论文致力于构建圆红冬孢酵母遗传操作平台,并尝试进行菌株代谢性能的改造,取得结果如下:尝试了多种基于同源重组机制的遗传操作方法,均未获得预期的圆红冬孢酵母转化子。初步分析表明圆红冬孢酵母同源重组机制不发达,为改进转化方法指明了方向。建立了基于非同源重组机制的圆红冬孢酵母遗传操作方法。采用农杆菌介导转化方法获得了稳定的潮霉素抗性转化子,实现外源抗性基因在圆红冬孢酵母单倍体及二倍体菌株中的整合表达。发掘多个抗性筛选标记;实现通过重复多次转化,得到了稳定的双抗性和三抗性圆红冬孢酵母突变株,并发展了一种快速的菌落PCR方法进行了原位基因型鉴定。初步尝试了菌株代谢性能改造研究。以类胡萝卜素代谢性能为目标筛选圆红冬孢酵母T-DNA随机插入突变文库,获得了一系列具有新性状的菌株,并通过染色体步移技术确定了相应靶点基因。尝试将油酸羟化酶基因表达盒整合到圆红冬孢酵母基因组中,得到了基因型正确的菌株,但未检测到预期产物。
语种: 中文
内容类型: 学位论文
URI标识: http://cas-ir.dicp.ac.cn/handle/321008/119884
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林心萍. 产油真菌圆红冬孢酵母遗传操作平台构建及应用研究[D]. 中国科学院研究生院. 2014.
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