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学科主题分析化学
基于亲水作用色谱的N-连接糖肽和糖链的富集方法研究
曹丽伟
2014-05-07
导师梁鑫淼
专业分析化学
授予单位中国科学院研究生院
学位博士
英文摘要首次将强阴离子交换材料XCharge SAX在静电排斥-亲水作用色谱(ERLIC)模式下用于选择性富集糖肽。在最优条件下,对XCharge SAX的富集选择性、糖基化位点覆盖率及检测灵敏度进行了评价。发展了基于两性离子亲水性材料Click TE-GSH的糖蛋白质组分析方法。通过调节流动相的pH值,使得Click TE-GSH材料在ERLIC模式下对糖肽进行富集,以增加其对糖肽的选择性。将该材料应用于人血清蛋白质样品的分析,从100 μg人血清蛋白酶解物中鉴定到130个非冗余N-糖基化蛋白集及其中265个唯一性N-糖基化位点信息。发展了一种基于质谱的糖蛋白质组学方法来鉴定酿酒酵母蛋白中的糖基化位点。在该方法中,用两性离子亲水性材料Click TE-Cys来富集酵母酶解液中的糖肽,以提高该方法对糖肽的选择性以及糖基化位点覆盖率。为了提高所鉴定到糖基化位点的可靠性,我们用两种糖苷酶(PNGase F酶和Endo Hf酶)分别对富集得到的酵母糖肽馏份进行去糖基化。基于该方法,共鉴定到来自79个酵母糖蛋白上的135个糖基化位点。发展了基于两性离子亲水性材料Click TE-Cys的N-连接聚糖富集方法。独特的表面结构和电荷分布使得Click TE-Cys具有很高的亲水性,而Click TE-Cys的这一特点使得其能够有效将共存的肽段和盐从聚糖馏份中去除。与此同时,该方法可以实现对生物样品中聚糖的快速富集。
语种中文
文献类型学位论文
条目标识符http://cas-ir.dicp.ac.cn/handle/321008/119886
专题中国科学院大连化学物理研究所
推荐引用方式
GB/T 7714
曹丽伟. 基于亲水作用色谱的N-连接糖肽和糖链的富集方法研究[D]. 中国科学院研究生院,2014.
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