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DICP OpenIR  > 中国科学院大连化学物理研究所  > 学位论文
学科主题: 分析化学
题名: 基于酰肼化学的糖基化蛋白质组定量分析新方法
作者: 孙珍
答辩日期: 2014-05-10
导师: 邹汉法 ;  叶明亮
专业: 分析化学
授予单位: 中国科学院研究生院
学位: 博士
摘要: 本论文首先发展了一种通过同时分析糖基化蛋白的糖基化肽段和非糖基化肽段的细胞表面捕集技术,能够可靠并且特异性定量细胞表面糖基化蛋白质。该方法可以在没有超速离心亚细胞分离的条件下,以较高的特异性鉴定细胞表面糖基化蛋白质。之后又将发展的细胞表面捕集方法用于胃癌细胞以及白血病细胞多药耐药性相关的细胞表面糖基化蛋白质组的差异分析,进一步深入了解癌症细胞化学耐受性的潜在机理。在胃癌细胞的研究中证实了Asn99位处发生糖基化可以显著提高P-gP的药物泵出功能;在白血病细胞的研究中也证实了P-gP在耐药细胞中的变化趋势,另外发现了3个新的潜在的和药物耐药性相关的糖基化蛋白质。本论文还针对提高糖基化肽段定量分析的富集回收率和检测灵敏度,发展了一种在酰肼微球上捕集和二甲基标记糖基化肽段的一体化定量分析方法。这一一体化定量分析方法被证实是准确可靠的,可以在2个数量级的范围内保持良好的线性关系。与基于溶液的标记方法相比,这一分析方法具有高富集回收率以及高检测灵敏度。之后又将这一一体化定量分析方法进行改进,在利用酰肼微球富集糖基化蛋白质的基础上,组合使用了三种酶切方法(胰蛋白酶trypsin,胰蛋白酶trypsin和内切酶Glu-C,糜蛋白酶chymotrypsin),并结合固相标记技术,实现了规模化定量分析正常和肝癌人肝组织的N-糖基化蛋白组的表达差异,有效增加了人肝N-糖基化蛋白组分析的序列以及位点覆盖率。定量得到的数据是目前为止得到的人肝组织N-糖基化蛋白组的最大定量数据集。
语种: 中文
内容类型: 学位论文
URI标识: http://cas-ir.dicp.ac.cn/handle/321008/119919
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孙珍. 基于酰肼化学的糖基化蛋白质组定量分析新方法[D]. 中国科学院研究生院. 2014.
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