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DICP OpenIR  > 中国科学院大连化学物理研究所  > 学位论文
学科主题: 生物化工
题名: 金黄色葡萄球菌组氨酸蛋白激酶AgrC的生物体系外研究
作者: 王丽娜
答辩日期: 2014-05-15
导师: 范圣第
专业: 生物化工
授予单位: 中国科学院研究生院
学位: 博士
摘要: 在金黄色葡萄球菌感染宿主过程中,附属基因调节系统起着关键的作用,该系统中的双组份信号转导系统由组氨酸感受激酶AgrC和反应调节蛋白AgrA组成,其信号转导机制的阐明对于解决病原菌引起的感染和耐药问题具有重要意义。首先,本文利用无限制克隆法构建表达载体pET-28a(+)-AgrC-GFP。将绿色荧光蛋白(green fluorescence protein, GFP) 融合到AgrC 蛋白的C末端,在大肠杆菌宿主细胞内表达,通过测量整个细胞的荧光强度实时监测AgrC蛋白的表达水平,考察宿主细胞,培养基,温度和诱导剂浓度对蛋白表达量的影响。其次,利用6种在线软件TMPred,TMHMM 2.0,TOPCONS,TopPred II,SOSUI和 MEMSAT2,结合GFP融合技术和半胱氨酸可接近方法(SCAM),分析确定AgrC蛋白拓扑结构。然后,以截断型AgrC(AgrCTM6-7C)为模式蛋白,在AgrCTM6-7C的C末端融合GFP,将AgrCTM6-7C-GFP蛋白镶嵌在脂质体囊泡上,即形成蛋白脂质体。通过测量GFP荧光强度可方便快速优化蛋白镶嵌条件。利用荧光显微镜、透射电镜和动态光散射对蛋白脂质体进行表征。最后,将全长 AgrC蛋白镶嵌在脂质体囊泡上,构建人工信号转导模型。硫醇试剂标记实验确定AgrC蛋白在脂质体上的取向。并对AgrC蛋白脂质体感受胞外信号并将信息传递到胞内进行可行性分析。
语种: 中文
内容类型: 学位论文
URI标识: http://cas-ir.dicp.ac.cn/handle/321008/119922
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王丽娜. 金黄色葡萄球菌组氨酸蛋白激酶AgrC的生物体系外研究[D]. 中国科学院研究生院. 2014.
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